一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测茶叶中国合成着色剂的残留。该处理方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
柠檬黄（CAS：1934-21-0），苋菜红（CAS：915-67-3），胭脂红（CAS：2611-82-7），
日落黄（CAS：2783-94-0），诱惑红（CAS：25956-17-6），亮蓝（CAS：3844-45-9）。
三、应用范围
本方法适用于茶叶合成着色剂量的HPLC检测及确证。
四、实验材料
SimplyGreen，聚酰胺小柱500mg/6ml（Cat.No.）
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取2.0g红茶茶叶置于50ml离心管中，加入20ml水，于震荡器中震荡提取30min，4000r/min离心5min，上层清液备用。
2、SPE柱净化
（1）活化：聚酰胺柱使用前用5ml甲醇活化，5ml水平衡。
（2）上样和洗脱：取5ml备用液过柱，弃去流出液；用3ml水淋洗，再用足量甲醇-甲酸溶液（6:4，v/v）淋洗至流出液透明，弃去流出液，抽干小柱；用5ml5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液。（整个上样、洗脱过程控制流速在1ml/min内）。
（3）上机测试：将洗脱液定容至5ml，取1ml经0.22um水系虑膜过滤，供上机测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：InertSustain-C18（4.6mm×250mm，5um）
检测器：Waters 2996紫外检测器
检测波长：254nm
流动相：A：甲醇 B：0.02mol/L乙酸胺缓冲溶液
表1梯度洗脱条件
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时间/min
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A（%）
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B（%）
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--
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5
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95
|
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10.0
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20
|
80
|
|
18.0
|
60
|
40
|
|
25.0
|
60
|
40
|
|
25.1
|
5
|
95
|
|
35.0
|
5
|
95
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流速：1.0ml/min
进样体积：20ul
六、实验结果
1、10.0mg/kg茶叶中合成着色剂的添加回收结果
表2 10.0mg/kg茶叶中合成着色剂的添加回收结果
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名称
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回收率（%）
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平均回收率（%）
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RSD（%）
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1
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2
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3
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柠檬黄
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90.5
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88.5
|
88.9
|
89.3
|
1.2
|
|
苋菜红
|
107.7
|
107.1
|
106.6
|
107.1
|
0.5
|
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胭脂红
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109.4
|
107.1
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110.0
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108.8
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1.4
|
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日落黄
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104.4
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106.1
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99.0
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103.2
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3.6
|
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诱惑红
|
107.8
|
108.2
|
105.9
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107.3
|
1.1
|
|
亮蓝
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87.2
|
93.4
|
89.2
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89.9
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3.5
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2.添加水平为10.0mg/kg茶叶中合成着色剂检测的液相色谱图
图1添加水平为10.0mg/kg茶叶中合成着色剂检测的液相色谱图
