一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为动物源性食品(动物肌肉和肝脏)中克伦特罗(clenbuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、莱克多巴胺(ractompamine)等3种β-受体激动剂的样本前处理净化方法，HPLC法作为检测手段。SimplyGreen MCX(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
克伦特罗(CAS:37148-27-9)、沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)、莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)。
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(动物肌肉和肝脏)中克伦特罗(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、莱克多巴胺(Rac)等3种β-受体激动剂残留药 物的检测。
四、参考标准
《GB/T 22286-2008 动物性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定
液相色谱串联质谱法》。
五、实验材料
SimplyGreen MCX必威首页登录平台官网
60mg/3mL
六、实验方法
1、样品提取
称取2±0.01 g经捣碎的猪肉样品，于50
mL离心管中，加8 mL乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L，pH5.2)，振荡提取15 min， 4000 r/min离心10 min，取上清液4 mL于50 mL离心管中，并加入0.1mol/L高氯酸溶液5 mL，混合均匀，用高氯酸调节pH到1±0.3。4000 r/min离心10
min后将全部上清液转移到50 mL离心管中，用10
mol/L氢氧化钠溶液调节pH到11。加入10 mL饱和氯化钠和10 mL异丙醇-乙酸乙酯(6:4, v/v)混合溶液，充分提取5 min，在4000 r/min离心10 min。
转移全部有机相，在40 ℃水浴下氮吹干。加入5 mL乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L，pH5.2)，超声混匀，使残渣充分溶解后备用。
2、SPE柱净化
(1) 活化：MCX柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2) 上样和洗脱：取上述残渣溶液上柱，控制流速0.5 mL/min。后依次用2 mL水、2 mL 2%甲酸水、2 mL甲醇淋洗柱子并抽干，然后用2 mL5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。
(3) 重新溶解：收集洗脱液，于40℃氮气吹干，准确加入1.0 mL 0.1%甲酸/水-甲醇 (95:5，v/v)溶液溶解残余物，0.22 μm滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2690 色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6mm Id，5 µm) 检测器：紫外249nm，荧光激发波长226nm，发射波长306nm
流动相：A:甲醇 B:0.1%甲酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱
表1梯度洗脱条件
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时间/min
|
A/%
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B/%
|
|
0.0
|
10
|
90
|
|
80.
|
48
|
52
|
|
15.0
|
48
|
52
|
|
15.1
|
10
|
90
|
|
22.0
|
10
|
90
|
流速：1.0 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：20 μL
七、实验结果
1、添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中克伦特罗(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、莱克多巴胺(Rac)等3种
β-受体激动剂的添加回收结果
表2 添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中3种β-受体激动剂的添加回收结果
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名称
|
回收率（%）
|
平均回收率（%）
|
RSD（%）
|
|
1
|
2
|
3
|
|
克伦特罗(Clen)
|
85
|
88.4
|
89.4
|
87.6
|
2.6
|
|
沙丁胺醇(Sal)
|
84.4
|
85.4
|
88.2
|
86.0
|
2.3
|
|
莱克多巴(Rac)
|
85.0
|
86.6
|
88.4
|
86.7
|
2.0
|
表3 W品牌同型号柱，添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中3种β-受体激动剂的添加回收结果
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名称
|
回收率（%）
|
平均回收率（%）
|
|
1
|
2
|
|
克伦特罗(Clen)
|
79.9
|
78.4
|
79.2
|
|
沙丁胺醇(Sal)
|
86.4
|
84.6
|
85.5
|
|
莱克多巴(Rac)
|
86.9
|
81.8
|
84.4
|
2、添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中三种β-受体激动剂检测色谱图
图1 沙丁胺醇和莱克多巴胺的荧光色谱图
图2 克伦特罗的紫外色谱图
