第er篇食品中无机砷的测定
第yi法 液相色谱-原子荧光光谱法(LC-AFS)法
31 原理
食品中无机砷经稀硝酸提取后,以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性环反应,生成气态砷化合物,以原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性,外标法定量。
25 试剂和材料
注:除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
25.1试剂
25.1.1 磷酸二氢铵(NH4H2PO4)：分析纯。
25.1.2 硼氢化钾(KBH4)：分析纯。
25.1.3 氢氧化钾(KOH)。
25.1.4 硝酸(HNO3)。
25.1.5 盐酸(HCl)。
25.1.6 氨水(NH3·H2O)。
25.1.7 正己烷[CH3(CH2)4CH3]。
25.2 试剂配制
25.2.1 盐酸溶液[20%(体积分数)]:量取200 mL盐酸,溶于水并稀释至1 000 mL。
25.2.2 硝酸溶液(0.15 mol/L):量取10 mL硝酸,溶于水并稀释至1 000 mL。
25.2.3 氢氧化钾溶液(100 g/L):称取10g氢氧化钾,溶于水并稀释至100 mL。
25.2.4 氢氧化钾溶液(5 g/L):称取5 g氢氧化钾,溶于水并稀释至1 000 mL。
25.2.5 硼氢化钾溶液(30 g/L):称取30 g硼氢化钾,用5 g/L氢氧化钾溶液溶解并定容至1 000 ml。现用现配。
25.2.6 磷酸二氢铵溶液(20 mmol/L) :称取2.3g磷酸二氢铵,溶于1000 mL水中,以氨水调节pH至8.0,经0.45 μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30 min,备用。
25.2.7 磷酸二氢铵溶液(1 mmol/L):量取20 mmol/L磷酸二氢铵溶液50 mL,水稀释至1 000 mL, 以氨水调pH至9.0,经0.45 μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30 min,备用。
25.2.8 磷酸二氢铵溶液(15 mmol/L) :称取1.7 g磷酸二氢铵,溶于1 000 mL水中,以氨水调节pH至6.0,经0.45 μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30 min,备用。
25.3标准品
25.3.1三氧化二砷(As2O3) 标准品:纯度≥99.5%。
25.3.2砷酸二氢钾(KH2AsO4)标准品:纯度≥99.5%。
25.4标准溶液配制
25.4.1亚砷酸盐[As(Ⅲ)]标准储备液(100
mg/L,按As计):准确称取三氧化二砷0.0125 g,加
100 g/L氢氧化钾溶液1 ml.和少量水溶解,转人100 ml.容量瓶中,加入适量盐酸调整其酸度近中性，加水稀释至刻度。4C保存,保存期一年。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液物质。
25.4.2砷酸盐[As(V )]标准储备液(100
mg/L,按As计):准确称取砷酸二氢钾0.0240 g,水溶解,转
人100mL.容量瓶中并用水稀释至刻度。4C保存,保存期一年。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液物质。
25.4.3 As(Ⅲ)、 As( V )混合标准使用液(1.00 mg/L,按As计):分别准确吸取1.0 mL As(Ⅲ)标准储备液(100 mg/L).1.0 mL As(V )标准储备液(100 mg/L)于100 mL容量瓶中,加水稀释并定容至刻度。现用现配。
26仪器和设备
注:所用玻璃器皿均需以硝酸溶液(1+4)浸泡24 h,用水反复冲洗,最后用去离子水冲洗干净。
26.1 液相色谱-原子荧光光谱联用仪(LC-AFS):由液相色谱仪(包括液相色谱泵和手动进样阀)与原子荧光光谱仪组成。
26.2 组织匀浆器。
26.3 高速粉碎机。
26.4 冷冻干燥机。
26.5 离心机:转速≥8000 r/ min。
26.6
pH 计:精度为0.01。
26.7 天平:感量为0.1 mg和1 mg。
26.8 恒温干燥箱(50℃~300℃)。
26.9 C18净化小柱或等效柱。
27 分析步骤
27.1 试样预处理
见5.1。
27.2试样提取
27.2.1稻米样品
称取约1.0 g稻米试样(准确至0.001 g)于50 ml塑料离心管中,加入20 mL 0.15
mol/L硝酸溶液，放置过夜。于90℃恒温箱中热浸提2.5 h,每0.5 h振摇1 min。提取完毕，取出冷却至室温，8 000 r/min离心15 min,取上层清液,经0.45μm有机滤膜过滤后进样测定。按同一操作方法作空白试验。
27.2.2水产动物样品
称取约1.0 g水产动物湿样(准确至0.001 g),置于50 ml.塑料离心管中,加入20 mL 0.15
mol/L硝酸溶液,放置过夜。于90 C恒温箱中热浸提2.5h,每0.5h振摇1 min。提取完毕,取出冷却至室温，8000r/min离心15min。取5mL上清液置于离心管中，加人5mL正己烷，振摇1min后，8 000 r/min离心15 min,弃去上层正己烷。按此过程重复一次。吸取下层清液,经0.45 μm有机滤膜过滤及C18小柱净化后进样。按同一操作方法作空白试验。
27.2.3婴幼儿辅助食品样品
称取婴幼儿辅助食品约1.0
g(准确至0.001 g)于15 ml.塑料离心管中,加入10 ml 0.15 mol/L硝酸溶液,放置过夜。于90 C恒温箱中热浸提2.5 h,每0.5 h振摇1 min,提取完毕,取出冷却至室温。8 000 r/min离心15 min。取5 ml上清液置于离心管中,加入5 ml.正己烷,振摇1 min,8 000 t/min离心15 min,弃去上层正已烷。按此过程重复-一次。吸取下层清液,经0.45 μm有机滤膜过滤及C18小柱净化后进行分析。按同一操作方法作空白试验。
27.3仪器参考条件
27.3.1液相色谱参考条件
色谱柱:阴离子交换色谱柱(柱长250 mm,内径4 mm),或等效柱。阴离子交换色谱保护柱(柱长10 mm,内径4 mm) ,或等效柱。
流动相组成:
a) 等度洗脱流动相:15 mmol/L.磷酸二氢铵溶液(pH
6.0) ,流动相洗脱方式:
等度洗脱。流动相流速:1.0 ml/min;进样体积:100 μL。等度洗脱适用于稻米及稻米加工食品。
b)梯度洗脱:流动相A:1 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH
9.0) ;流动相B:20 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH 8.0)。(梯度洗脱程序见附录A中的表A.4.)流动相流速:1.0 ml./min;进样体积100μL。梯度洗脱适用于水产动物样品、含水产动物组成的样品、含藻类等海产植物的样品以及婴。
以上为食品安全国家标准的部分内容，更多内容可点击下载：GB 5009.11-2014 食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定
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