葡聚糖凝胶色谱柱的原理

葡聚糖凝胶色谱柱的原理

凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。

葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。这就使得能进入凝胶内部与不能进入凝胶内部的分子，如同按照分子大小过筛一样，所以称为分子筛。可分离的分子量范围从几百到几十万不等。

葡聚糖凝胶柱色谱的分离顺序：操作时首先将凝胶在适宜的溶剂中浸泡，使其充分膨胀，然后再铺成薄层，加入样品后，再以同一溶剂洗脱，则样品中大分子化合物不能进入凝胶颗粒内部，只在凝胶颗粒间移动，因此阻力小，行动快，走在前面;而小分子化合物能自由扩散进入到凝胶内部，因此在色谱时受到的阻力较大，行动慢，走在后面。如此经过一段时间的洗脱，混合物中各组分就会按照分子的大小而获得分离。

基于葡聚糖凝胶色谱柱的原理，葡聚糖凝胶色谱柱Simpsil Sephadex G-10对阿莫西林等头孢类抗生素的分析效果很好。

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