1范围
本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、塞曼特罗(ceimat-erol)、塞布特罗(cimbuterol) 、莱克多巴胺(ractompamine)、克仑特罗(clenbuterol)、溴布特罗(brombu-terol)、苯氧丙酚胺(isoxsuprine)、马布特罗(mabuterol)、马贲特罗(mapenterol)、溴代克仑特罗(brom-chlorbuterol)残留量的液相色谱串联质谱的测定方法。
本标准适用于猪肝和猪肉中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马贲特罗、溴代克仑特罗残留量的检验.
本方法中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马贲特罗、澳代克仑特罗的检出限均为0. 5 μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682- 2008 , ISO 3696:1987 ,MOD)
3原理
试样中的残留物经酶解,用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心，上清液用异丙醇-乙酸乙酯提取，再用阳离子交换柱净化,液相色谱申联质谱法测定,内标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,试验用水应符合GB/T 6682一级水的标准。
4.1 甲醇:液相色谱纯。
4.2乙酸钠(CH3COONa ●3H2O)。
4.3 0.2 mol/L乙酸钠缓冲液:称取13. 6g乙酸钠,溶解于500 mL水中,用适量乙酸调节pH至5.2。
4.4 高氯酸:70% ~72%。
4.5 0.1 mol/L高氯酸:移取8.7 mL高氯酸,用水稀释至1 000 mL.
4.6 氢氧化钠。
4.7 10 mol/L氢氧化钠溶液:称取40 g氢氧化钠,用适量水溶解冷却后,用水稀释至100 mL.
4.8 饱和氯化钠溶液。
4.9 异丙醉-乙酸乙酯:(6+4,体积比)。
4.10 甲酸水溶液:2%。
4.11氨水甲醇溶液:5%。
4.12 0, 1%甲酸水溶液甲醇溶液:(95+5,体积比)。，
4. 13 β-葡萄糖酷甙酶/芳基硫酸酯酶(β-Glucuronidase/ aryl sulfatase) :10 000 units/ mg。
4.14 Oasis MCX阳离子交换柱:60mg/3mL,使用前依次用3mL甲醇和3mL水活化。
注: Oasis MCX阳离子交换柱是由Waters 公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了 方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品。
4.15 沙丁胺醇(CAS: 18559-94-9)、特布他林半硫酸盐(CAS: 2303 1-32-5)、塞曼特罗(CAS:54239 37-1)、塞布特罗(CAS:54239-37-1)、菜克多巴胺盐酸盐(CAS:90274-24-1)、克仑特罗盐酸盐(CAS:37148-27-9)、溴布特罗(CAS: 41937-02-4)、苯氧丙酚胺盐酸盐(CAS: 579- 56-6)、马布特罗(CAS: 54240-36-7)、马贲特罗(CAS95656-68-1)、溴代克仑特罗(CAS: 37153-52-9)标准品:纯度大于98%。
4.16 标准储备溶液:准确称取适量的沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马贲特罗、溴代克仑特罗标准品,用甲醇分别配制成100μg/mL的标准贮备液,保存于-18C冰箱内,可使用1年。
4.17 混合标准储备溶液(1 ug/mL):分别准确吸取1.00mL沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马贲特罗、溴代克仑特罗至100 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度，-18C 避光保存。
4.18 同位素内标物:克仑特罗-D9,沙丁胺酵-D3,纯度大于98%。
4.19 同位素内标储备溶液，准确称取适量的克仑特罗-D9、沙丁胺醇-D3,用甲醇配制成100μg/mL的标准贮备液,保存于-18℃冰箱内，可使用1年。
4.20 同位素内标工作溶液(10ng/mL):将 上述同位索内标储备溶液用甲醇进行适当稀释。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2均质器。
5.3旋涡混合器。
5.4离心机：5000r/min和15000r/m。
5.5氮吹仪。
5.6水平振荡器
5.7真空过柱装置
5.8 pH计。
5.9超声波发生器。
6样品制备
6.1 提取
称取2 g(精que到0. 01g）经捣碎的样品于50 mL离心管中,加人8 mL乙酸钠级冲液,充分混匀,再加50 uL β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸脂酶,混匀后,37C水浴水解12h。
添加100 uL 10ng/mL的内标工作液于待测样品中。加盖置于水平振荡器振荡15min,离心10min(5000 r/min),取4mL上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL混合均匀用高氯酸调节pH值到1士0.3。5000 r/min离心10min后,将全部上清液(约10mL)转移到50mL离心管中,用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10 mL饱和氯化钠溶液和10 mL异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液，充分提取,在5 000 r/min下离心10 min。
转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5 mL乙酸钠缓冲液，超声混匀,使残渣充分溶解后备用。
6.2净化
将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用2 mL水、2 ml 2%甲酸水溶液和2mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干,最后用2mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。流速控制在0.5 mL/min。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。
准确加入200 μL 0. 1%甲酸/水-甲醉溶液(95+5),超声混匀。将溶液转移到1.5 ml离心管中，15 000 r/min离心10 min。
上清液供液相色谱串联质谱测定。
7 液相串联质谱测定
7.1 液相色谱-串联质谱条件
a)色谱 柱:Waters ATLANTICS C18柱,150 mmX2.1 mm(内径),粒度5 pum;
b) 流动相: A:0. 1%甲酸/水,B:0.1%甲酸/乙腈，梯度淋洗见表1;
关于标准的更多内容可点击这里下载：GB_T 22286-2008 动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法
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