1范围
本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和液相色谱-质谱/质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝.猪肾等动物源性食品以及猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准.。
GB/T 6682分析实验案用水规格和试验方法(GB/T 6682- 1992 , neq ISO 3696: 1987)
3方法提要
试样中β-受体激动剂残留经酶解后,再用高氯酸溶液提取,经过滤和离心后，上清液用HLB和MCX必威首页登录平台官网
净化,液相色谱/串联质谱仪测定,外标峰面积法定量。
4制样方法
制样操作过程中应防止样品污染或残留物发生变化。
4.1动物肌肉 、肝脏、肾脏
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,剔除筋膜,用组织捣碎机充分捣碎均匀,装入洁净容器中,密封,并标明标记,于-18 ℃以下冷冻存放。
4,2 猪尿
从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g,充分混匀,装入洁净容器中,密封,并标明标记,于-18℃以下冷冻存放。
5试剂和材料
除特殊注明外,本法所用试剂均为色谱纯,水为GB/T6682规定的yi级水。
5.1甲醇。
5.2高氯酸 :分析纯。
5.3氨水:分析纯(浓度25%~28%)。
5.4甲酸(99% ,ameisensaeure)。
5.5氢氧化钠:分析纯。
5.6乙酸:分析纯。
5.7乙 酸钠(NaAc●4H2O) :分析纯。
5.8乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH 5.2):称取43.0 g NaAc●4H2O和25.2 g乙酸,加水溶解并定容到100mL。
5.9 0.1%甲酸水溶液。
5.10 5%印醇氨溶液:量取5mL氨水(5.3) ,用甲醇定容至100 mL.
5.11 20%甲醇水溶液。
5.12 0.1mol/L高氯酸。
5.13 0.1mmol/L高氯酸。
5.14 β-葡糖醛酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶溶液(β-glucuronidasc/ arylsulfatasc) (30 U/mL)。
5.15 标准物质：妥布特罗(tulobhutcrol, CAS: 41570-61-0)、特布它林(terbutaline, CAS: 23031-25-6)、沙丁胺醇(salbutamnol,CAS:51022- 70-9)、非诺特罗(fenoterol ,CAS: 1944-12-3)、福莫特罗(formoteral,CAS:73573-87-2)、克伦特罗(clenbutcrol, CAS: 37148-27-9)、莱克多巴胶(ractoparninc, CAS: 97825-25-7)、异丙喘宁(metaproterenol,CAS:586-06-1).纯度均大于等于99%。
5.16 标准溶液
5.16.1 标准储备溶液:准que称取克伦待罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、菜克
多巴胺、异丙喘宁各0. 010 0 g,分别用甲醇溶解并定容至10 mL，浓度为1 000 mg/L, -18℃冰箱中保存，有效期12个月。
5.16.2 标推工作液:根据需要,用甲醇将标准储备溶液(5.16.1)配制为适当浓度的标准工作液。标准工作液应使用前配制。
5.17 HLB 周相萃取桃(500 mg,6 mL)或其他等效柱.
5. 18 MCX必威首页登录平台官网
(60 mg,3 mL)或其他等效柱。
6 仪器
6.1高效 液相色谱串联质谱仪。
6.2电子 天平:感量0.0001 g.
6.3电子天平:感益0.01 g。
6.4组织匀浆机。
6.5旋涡混合器。
6.6 冷冻离心机(最大转速高于10 000 r/min).
6.7聚丙烯离心管（50 mL）。
6.8酸度计（0. 01)。
6.9 氮吹仪。
6.10固相萃取仪。
6.11超声清洗仪(功率5 W)。
7提取及净化
7.1提取
准确称收10.0g样品,加入15 mL pH 5.2的乙酸-乙酸钠缓冲溶液(5.8),1 000 r/min匀浆1 min,再加入β-葡糖醛酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶溶液100ul，于37℃±1℃振荡酶解过夜。取出冷却后，用高氯酸调pH值至1. 0,超声振荡20 min,取出置于80℃水浴中加热30 min。放入冷冻离心机中,10℃
10 000 r/min离心10 min。倾出上清液,残渣再用10 mL 0.1 mol/L高氯酸溶液提取一次,10000 r/min离心。合并上清液。用1 mol/L氢氧化钠溶液调pH值至4. 0，此溶液待过HLB必威首页登录平台官网
。
7.2净化
7.2. 1 HLB柱净化
HLB周相萃取柱(5.17),使用前用6 mL甲醇、6 mL水活化。将7.1规取的溶液以2 mL/min~3 mL/min的速度过柱,弃去滤液,用2 mL 5%甲醇淋洗,小柱抽干,再用6 mL甲醇洗脱。洗脱液用氮气吹至近干。用3mL 0.1mmol/L高氯酸溶液溶解残渣,供MCX柱净化用。
7.2.2 MCX柱净化
MCX柱(5.18) ,使用前用3 mL 5%甲醇氨、3 mL甲醇、3 m水、3 mL 0. 1 mmol/L高氯酸(pH 4. 0)溶液活化。将7.2.1制得的溶液过柱,弃去滤液,依次用1mL甲醇、1mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7ml 5%甲醇氨洗脱，洗脱液用氮气吹近干后,用甲醇-0.1%甲酸水(10+90)定容至1.0 mL,旋祸混合1 min,用于HPLC MS/MS测定。
7.3基质加标标准工作曲线的制备
将混合标准工作液(5.16.2)用初始流动相逐级稀释成0.5μg/L~50.0μg/L的标准系列溶液。称取与试样基质相应的阴性样品10.0g,加入标准系列溶液1.0mL,按照7.1、7.2与试样同时进行提取.和净化。
8 液相色谱-质谱/质谱测定
8.1 液相色谱条件
8.1.1色谱柱 :ACQUITY UPLCTM BEH C18柱(100 mmX2.1 mm,1.7 μm)或其他等效柱。
8.1.2流动相:甲醇-0.1%甲酸水梯度淋洗,参考梯度条件见表B.1。
8.1.3流速：300 μL/ min。
8.1.4柱温:40℃。
8.1.5进样量:10 μL。
8.2质谱参考条件
离子化模式:电喷雾电离正离子模式(ESI+);质谱扫描方式:多反应离子监测(MRM);其他参考
质谱条件见附录A。
关于标准的更多内容可点击这里下载：GB_T 21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法 液相色谱-质谱_质谱法
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