GB 5009.27-2016 食品安quan国家标准
食品中苯并（a）芘的测定
前 言
本标准代替GB/T5009.27—2003《食品中苯并(a)芘的测定》、GB/T22509—2008《动植物油脂苯并(a)芘的测定 反相高效液相色谱法》、SC/T3041—2008《水产品中苯并(a)芘的测定 高效液相色谱法》和NY/T1666—2008《肉制品中苯并(a)芘的测定 高效液相色谱法》。
本标准与GB/T5009.27—2003、GB/T22509—2008、SC/T3041—2008和NY/T1666—2008相
比，主要变化如下：
——标准名称修改为“食品安quan国家标准 食品中苯并(a)芘的测定”；
——修改了方法的适用范围；
——修改了样品前处理方法；
——删除了荧光分光光度法与目测比色法
1 范围
本标准规定了食品中苯并(a)芘的测定方法。
本标准适用于谷物及其制品(稻谷、糙米、大米、小麦、小麦粉、玉米、玉米面、玉米渣、玉米片)、肉及肉制品(熏、烧、烤肉类)、水产动物及其制品(熏、烤水产品)、油脂及其制品中苯并(a)芘的测定。
2 原理
试样经过有机溶剂提取，中性氧化铝或分子印迹小柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，反相液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲苯(C7H8)：色谱纯。
3.1.2 乙腈(CH3CN)：色谱纯。
3.1.3 正己烷(C6H14)：色谱纯。
3.1.4 二氯甲烷(CH2Cl2)：色谱纯。
3.2 标准品
苯并(a)芘标准品(C20H12，CAS号：50-32-8)：纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
警告——苯并(a)芘是一种已知的致癌物质，测定时应特别注意安quan防护! 测定应在通风柜中进行并戴手套，尽量减少暴露。如已污染了皮肤，应采用10%次氯酸钠水溶液浸泡和洗刷，在紫外光下观察皮肤上有无蓝紫色斑点，一直洗到蓝色斑点消失为止。
3.3 标准溶液配制
3.3.1 苯并(a)芘标准储备液(100μg/mL)：准确称取苯并(a)芘1mg(精que到0.01mg)于10mL容量
瓶中，用甲苯溶解，定容。避光保存在0℃~5℃的冰箱中，保存期1年。
3.3.2 苯并(a)芘标准中间液(1.0μg/mL)：吸取0.10mL苯并(a)芘标准储备液(100μg/mL)，用乙腈定容到10mL。避光保存在0℃~5℃的冰箱中，保存期1个月。
3.3.3 苯并(a)芘标准工作液：把苯并(a)芘标准中间液(1.0μg/mL)用乙腈稀释得到0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL的校准曲线溶液，临用现配。
3.4 材料
3.4.1 中性氧化铝柱：填料粒径75μm~150μm，22g，60mL（苯并芘专用柱）。
注：空气中水分对其性能影响很大，打开柱子包装后应立即使用或密闭避光保存。由于不同品牌氧化铝活性存在差异，建议对质控样品进行测试，或做加标回收试验，以验证氧化铝活性是否满足回收率要求。
3.4.2 苯并(a)芘分子印迹柱：500mg，6mL。
注：由于不同品牌分子印迹柱质量存在差异，建议对质控样品进行测试，或做加标回收试验，以验证是否满足要求。
3.4.3 微孔滤膜：0.45μm。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪：配有荧光检测器。
4.2 分析天平：感量为0.01mg和1mg。
4.3 粉碎机。
4.4 组织匀浆机。
4.5 离心机：转速≥4000r/min。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 超声波振荡器。
4.8 旋转蒸发器或氮气吹干装置。
4.9 固相萃取装置。
5 分析步骤
5.1 试样制备、提取及净化
5.1.1 谷物及其制品
预处理：去除杂质，磨碎成均匀的样品，储于洁净的样品瓶中，并标明标记，于室温下或按产品包装要求的保存条件保存备用。
提取：称取1g(精que到0.001g)试样，加入5 mL 正己烷，旋涡混合0.5 min，40 ℃下超声提取10min，4000r/min离心5min，转移出上清液。再加入5mL正己烷重复提取一次。合并上清液，用下列2种净化方法之一进行净化。
净化方法1：采用中性氧化铝柱，用30mL正己烷活化柱子，待液面降至柱床时，关闭底部旋塞。将待净化液转移进柱子，打开旋塞，以1mL/min 的速度收集净化液到茄形瓶，再转入50mL正己烷洗脱，继续收集净化液。将净化液在40℃下旋转蒸至约1mL，转移至色谱仪进样小瓶，在40℃氮气流下浓缩至近干。用1mL正己烷清洗茄形瓶，将洗涤液再次转移至色谱仪进样小瓶并浓缩至干。准确吸取1mL乙腈到色谱仪进样小瓶，涡旋复溶0.5min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。
净化方法2：采用苯并(a)芘分子印迹柱，依次用5mL二氯甲烷及5mL正己烷活化柱子。将待净化液转移进柱子，待液面降至柱床时，用6mL正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。将净化液在40℃下氮气吹干，准确吸取1mL乙腈涡旋复溶0.5min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。
5.1.2 熏、烧、烤肉类及熏、烤水产品
预处理：肉去骨、鱼去刺、贝去壳，把可食部分绞碎均匀，储于洁净的样品瓶中，并标明标记，于-16℃~-18℃冰箱中保存备用。
提取：同5.1.1中提取部分。
净化方法1：除了正己烷洗脱液体积为70mL外，其余操作同5.1.1中净化方法1。
净化方法2：操作同5.1.1中净化方法2。
5.1.3 油脂及其制品
提取：称取0.4g(精que到0.001g)试样，加入5mL正己烷，旋涡混合0.5min，待净化。
注：若样品为人造黄油等含水油脂制品，则会出现乳化现象，需要4000r/min离心5min，转移出正己烷层待净化。
净化方法1：除了最后用0.4mL乙腈涡旋复溶试样外，其余操作同5.1.1中的净化方法1。
净化方法2：除了最后用0.4mL乙腈涡旋复溶试样外，其余操作同5.1.1中的净化方法2。
试样制备时，不同试样的前处理需要同时做试样空白试验。
5.2 仪器参考条件
a) 色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；
b) 流动相：乙腈+水=88+12；
c) 流速：1.0mL/min；
d) 荧光检测器：激发波长384nm，发射波长406nm；
e) 柱温：35℃；
f) 进样量：20μL。
5.3 标准曲线的制作
将标准系列工作液分别注入液相色谱中，测定相应的色谱峰，以标准系列工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得到标准曲线回归方程。苯并(a)芘标准溶液的液相色谱图见图A.1。
5.4 试样溶液的测定
将待测液进样测定，得到苯并(a)芘色谱峰面积。根据标准曲线回归方程计算试样溶液中苯并(a)芘的浓度。
6 分析结果的表述
试样中苯并(a)芘的含量按式(1)计算：
式中：
X ——试样中苯并(a)芘含量，单位为微克每千克(μg/kg)；
ρ ——由标准曲线得到的样品净化溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
V ——试样最终定容体积，单位为毫升(mL)；
m ——试样质量，单位为克(g)；
1000——由ng/g换算成μg/kg的换算因子。
结果保留到小数点后一位。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝dui差值不得超过算术平均值的20%。
8 其他
方法检出限为0.2μg/kg，定量限为0.5μg/kg。
