GB 23200.57-2016 食品安全国家标准
食品中乙草胺残留量的检测方法
前言
本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。
本标准代替SN/T 2322-2009 《进出口食品中乙草胺残留量检测方法》。与SN/T 2322-2009 相比,主要变化如下:
——标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式;
——标准名称中“进出口食品”改为“食品”;
——标准范围中增加“其他食品可参照执行”。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为:
——SN/T 2322-2009。
1范围
本标准规定了食品中乙草胺残留量的气相色谱测定、气相色谱-质谱法确证和制样方法。
本标准适用于花生、大豆、玉米、小麦、洋葱、海菜.鸡肉、猪肉、腰果和松茸中乙草胺残留量的测定,其他食品可参照执行。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的乙草胺残留物用乙腈或乙酸乙酯提取,经凝胶渗透色谱仪(GPC)和(或)硅胶必威首页登录平台官网
(SPE)净化,用气相色谱法(GC)测定和气相色谱-质谱法(GC-MS)确证,外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682中规定的一级水。
4.1试剂
4.1.1 正已烷(C6H14)。
4.1.2乙酸乙酯(C4H8O2)。
4.1.3 环已烷(C6H12)。
4.1.4 乙腈(C2H3N)。
4.1.5丙酮(C3H6O)。
4.1.6无水硫酸钠(Na2SO4):经650℃灼烧4 h,储于密封容器中备用。
4.2溶液配制
4.2.1乙酸乙酯-正已烷(3+ 97,体积比):取30 mL乙酸乙酯,加入970 mL正已烷,摇匀备用。
4.2.2乙酸乙酯-正已烷(5+95,体积比):取50 mL乙酸乙酯,加入950 mL正已烷,摇匀备用。
4.3 标准品
4.3. 1乙草胺标准品(acetochlor,C14 H20ClNO2,CAS号:34256-82-1):纯度≥98%。
4.4标准溶液配制
4.4. 1乙草胺标准溶液:称取适量的乙草胺标准品,用丙酮配成浓度为100μg/ mL的标准储备液。根据需要将标准储备溶液用正已烷稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液和标准工作液在0℃~4℃条件下避光储存。有效期6个月。
5仪器与设备
5. 1气相色谱仪: 配微池电子捕获检测器(μ-ECD)。
5.2气相色谱质谱仪: 配电子轰击源(EI)。
5.3凝胶渗透色谱仪。
5.4旋转蒸发仪。
5.5 离心机:5000 r/ min。
5.6高速均质器。
5.7硅胶必威首页登录平台官网
:6 mL/ 1000 mg,或相当者;使用前用10 mL正已烷淋洗。
5.8离心管:100 mL,塑料和玻璃。
5.9滤膜:0. 45μm,有机相。
5.10分析天平:感量0.01g和0.0001g。
6试样制备与保存
6.1取样部位
样品取样部位按CB 2763的规定执行。
6.2蔬菜类、食用菌类
6.2.1取洋葱等有代表性辛辣蔬菜祥品500g,将其切成小块。装入洁净的容器内,密闭并标明标记。- 18℃以下保存。
6.2.2取有代表性蔬菜样品(洋葱等辛辣蔬菜除外)和松茸等有代表性食用菌样品500 g将其用捣碎机加工成浆状。混匀,装入洁净的容器内,密闭并标明标记。-18℃以下保存。
6.3海菜
取有代表性海菜样品500 g,切碎后,用捣碎机加工成浆状。混匀,装入清净的容器内,密闭并标明标记。-18℃以下保存
6.4粮谷和坚果类
取花生、玉米、小麦、大豆、腰果等有代表性样品500 g,用粉碎机粉碎,混勾,装入洁净的容器内,密闭并标明标记。4℃以下保存。
6.5 动物源类
取鸡肉、猪肉等有代表性样品500g,用绞肉机绞碎,混匀,装入洁净的容器内,密闭并标明标记。-18℃以下保存。
7测定步骤
7.1 提取
7.1.1 粮谷、坚果
称取试样10 g(精确至0.1 g)于100 mL塑料离心管中,加入50 mL乙腈,在匀浆器上匀浆2 min。以4000r/min离心10min,将上清液倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用10mL乙酸乙酯-环已烷溶液溶解残渣,过膜,供凝胶渗透色谱(GPC)净化。
7.1.2 禽肉组织
称取试样10g(精确到0.1g)于100mL塑料离心管中,加入5g无水硫酸钠,搅拌均匀,加入50mL乙腈,在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min,将上清液用无水硫酸钠脱水后倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用10 mL乙酸乙酯-环己烷溶液溶解残渣,过膜,供凝胶渗透色谱(GPC)净化。
7.1.3 洋葱
称取试样5 g(精确至0.1g)于100 mL玻璃离心管中,在700 W消解功率下微波消解40s。恢复至室温,加入50mL乙酸乙酯,在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min,将上清液倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用1mL正已烷溶解残渣,供必威首页登录平台官网
净化。
7.1.4 海菜、松茸
称取试样5g(精确至0.1g)于100 mL玻璃离心管中,加入50 mL乙酸乙酯,在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min,将上清液倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用1mL正已烷溶解残渣,供必威首页登录平台官网
净化。
7.2 净化
7.2.1凝胶渗 透色谱净化条件
a) 色谱柱:S- X3; 20 cm×2 cm(内径) ,或相当者;
b) 流动相:环已烷-乙酸乙酯(1+1,体积比);
c) 流速:5.0 mL/ min;
d) 进样量:5.0 mL;
e) 淋洗体积:40 mL;
f) 收集体积:30 mL;
g) 清洗体积:10 mL。
7.2.2 凝胶渗透色谱净化
将7.1中粮谷、坚果和禽肉组织的提取液过滤膜注入凝胶渗透色谱仪中,收集40mL~70mL流出液,在40℃水浴上减压浓缩至干,用1 mL正己烷溶解残渣,供必威首页登录平台官网
净化。
7.2.3 硅胶必威首页登录平台官网
净化
将7.1中洋葱、海菜、松茸提取液和7.2.2中净化液注入硅胶必威首页登录平台官网
中,再分2次,每次1mL正已烷润洗盛样液容器,注入硅胶柱中,依次用10mL正已烷、5mL乙酸乙酯-正己烷溶液和5mL乙酸乙酯-正己烷溶液淋洗,再用15mL乙酸乙酯-正己烷溶液洗脱,收集洗脱液于40℃水浴减压浓缩至干,用正己烷定容至5 mL,供气相色谱测定和气相色谱-质谱确证。
7.3 测定
7.3.1气相色谱参考条件
a) 色谱柱:DB-5石英毛细管柱,30 m×0.32 mm(内径),膜厚0.25μm,或相当者;
c) 进样口温度:250℃;
d) 检测器温度:325℃;
e) 载气:氦气,纯度≥99.995%,1.8mL/min;
f) 进样量:1μL;
g) 进样方式:无分流进样,0. 75 min后开阀。
7.3.2 气相色谱-质谱参考条件
a)色谱柱:DB-5MS石英毛细管柱,30 m×0.25 mm(内径) ,膜厚0. 25μm,或相当者;
c) 进样口温度:250℃;
d) 色谱-质谱接口温度:280℃;
e) 载气:氦气,纯度≥99.995%,1.0 mL/min;
f) 进样量:1μL;
g) 进样方式:无分流进样,0.75 min后开阀;
h) 电离方式:EI;
i) 电离能量:70eV;
j) 测定方式:选择离子监测方式(SIM) ;
k) 监测离子(m/z):定量162,定性174、234、269;
l) 溶剂延迟:3 min。
7.3.3气相色谱测定
根据样液中乙草胺含量情况,选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙草胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插选样测定。在上述色谱条件下,乙草胺的保留时间约为12. 3 min。标准品的色谱图参见图A.1。
7.3.4 气相色谱- -质谱确证
乙草胺标准溶液及样液均按7.3.2规定的条件进行测定,如果样液与标准溶液相同的保留时间有峰出现,则对其进行质谱确证。经确证分析被测物SIM色谱峰保留时间与标准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图中,所选择的离子均出现;选择离子m/z 162、174、234、269(其丰度比为100:54:24:8)与标准样品相关离子的相对丰度不一致,相似度在允许偏差之内(见表1),则可判定样品中存在乙草胺。乙草胺标准品总离子流色谱图、选择离子质谱图和全扫描质谱图参见图A.2图A. 3和图A.4。
表1 GC- MS确证相对离子丰度的最大允许偏差
相对丰度(基峰)
|
>50
|
20~50(含)
|
10~20(含)
|
≤10
|
允许的相对偏差
|
±20
|
±25
|
±30
|
±50
|
8结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中乙草胺的含量。计算结果需将空白值扣除。
式中:
X——试样中乙草胺的含量, 单位为毫克每千克(mg/kg);
c——标准工作液中乙草胺的浓度单位为微克每毫升(μg/ mL);
A——样品溶液中乙草胺的峰面积;
As——标准工作溶液中乙草胺的峰面积,
V——样液最终定容体积,单位为毫升(mL);
m——最终样液所代表的试样量, 单位为克(g)。
计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留2位有效数字。
9精密度
9.1在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率),应符合附录B的要求。
9.2在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率),应符合附录C的要求。
10 定量限和回收率
10.1 定量限
本方法的定量限均为0. 01 mg/ kg。
10.2 回收率
气相色谱法检测样品的添加浓度及回收率数据参见表D.1,气相色谱-质谱法检测样品的添加浓度及回收率数据参见表D.2。