GB/T 23816-2009 大豆中三嗪类除草剂残留量的测定
前言
本标准的附录A、附录B和附录C均为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国农业大学、中华人民共和国江西出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：陈冬东、祁彦、张新忠、杨强、占春瑞、李建中、安娟、李淑娟、储晓刚。
1范围
本标准规定了大豆中西玛通、西玛津、氰草津、阿特拉通、嗪草酮、西草净、莠去津、扑灭通、特丁通、莠灭净、特丁津、扑草净、异丙净残留量的高效液相色谱和液相色谱质谱/质谱的测定方法。
本标准适用于大豆中西玛通、西玛津、氰草津、阿特拉通、嗪草酮、西草净、莠去津、扑灭通、特丁通、莠灭净、特丁津、扑草净、异丙净残留量的检测及确证。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析试验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008， ISO 3696：1987，MOD）
3原理
试样中三嗪类除草剂用乙腈提取，经凝胶渗透色谱仪（GPC）及中性氧化铝SPE柱净化后，用高效液相色谱和液相色谱质谱/质谱测定，外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
4.1乙腈：色谱纯。
4.2二氯甲烷。
4.3甲酸。
4.4磷酸。
4.5必威首页登录平台官网
：中性氧化铝 1000 mg，6 mL，使用前用5 mL二氯甲烷活化。
4.6 滤膜：0.22μm。
4.7标准品：西玛通、西玛津、氰草津、阿特拉通、嗪草酮、西草净、莠去津、扑灭通、特丁通莠灭净、特丁津、扑草净、异丙净，纯度均大于98% ，相关信息参见附录A中表A.1。
4.8标准储备液：准确称取适量的13种三嗪类农药标准品，用乙腈分别配制成浓度为100μg/mL的标准储备液。
4.9混合标准工作液：根据需要，分别吸取13种三嗪类农药标准储备液用流动相稀释配制成适当浓度的混合标准工作液。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪（HPLC） ：配有二极管阵列检测器。
5.2液相色谱-质谱质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。
5.3均质器。
5.4凝胶渗透色谱：玻璃柱，700 mm×25mm；填料， Biobeads S-X3，40g。
5.5振荡器。
5.6离心机。
5.7 旋转蒸发仪。
5.8固相萃取装 置。
5.9氮吹仪。
5.10聚四氟乙烯离心管。
6试样制备与保存
6.1试样制备
取代表性试样500g，用粉碎机粉碎并使其全部通过0.425mm的样品筛，混和均匀，装入洁净的容器内，密封并标识。
6.2试样保存
试样于0℃~4℃避光保存。取样、制样及保存过程中应防止试样受到污染或者残留农药含量发生变化。
7分析步骤
7.1 提取
称取10 g（精确至0.01 g）试样于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加入40 mL乙腈，旋涡2 min混匀，于振荡器振荡30min，4000r/min下离心5min，将上清液转移至100mL圆底烧瓶中。样品残渣再加入40 mL乙腈重复以上操作提取一次，合并两次提取液，于35℃下旋转浓缩至约1 mL，N2吹干。用二氯甲烷溶解残渣，定容至10 mL。
7.2 净化
由GPC自动进样系统吸入上述提取样品液7.5 mL，定量环5.0 mL进样，以二氯甲烷为流动相，流量5mL/min，检测波长228nm，收集14min~24min的馏分于梨形瓶中，在40℃水浴下旋转蒸发至近干。用5mL二氯甲烷溶解。
将上述溶解液转移至活化好的小柱中。从上样开始就接收流出液（流速约1mL/min），再用5mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，经氮气吹千后用1mL流动相定容。过0.22μm滤膜，供HPLC和LC-MS/MS测定。
7.3 测定
7.3.1 HPLC 参考条件
a） 色谱柱：C18柱 ，250 mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者；
b） 流动相：乙腈-水，梯度条件参见附录B中表B.1；
c） 流速：1.0 mL/min；
d） 检测波长：228 nm；
e） 进样量：10μL；
f） 柱温：30℃。
7.3.2 LC-MS/MS 参考条件
a） 色谱柱：C18柱，150 mm×2.1mm（内径），3.5μm，或相当者；
b） 流动相：乙腈-0. 1%甲酸水溶液，梯度条件参见附录B中表B.2；
c） 流速：0.2 mL/ min；
d） 进样量：10μL；
e） 柱温：30℃；
f） 质谱条件：参见附录B中表B.3和表B. 4。
7.3.3定量测定
7.3.3.1 HPLC法：根据样液中三嗪类除草剂的含量，选定浓度相近的标准工作溶液，待测样液中三嗪类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液等体积参插，进样测定。在上述HPLC仪器条件下，参考保留时间分别为：西玛通9.10min，西玛津12.10min，氰草津12.30min，阿特拉通13.36 min，嗪草酮13.96 min，西草净16.70 min，莠去津17.53 min，扑灭通19.21 min，特丁通21. 32 min，莠灭净23.42 min，特丁津25.52 min，扑草净29.00 min，异丙净32.80 min。液相色谱图参见附录C中图C.1。
7.3.3.2 LC-MS/MS法：根据样液中三嗪类除草剂的含量，选定浓度相近的标准工作溶液，待测样液中三嗪类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液等体积参插，进样测定。
在上述仪器条件下，参考保留时间分别为：西玛通7.66min，西玛津9.12min，氰草津9.23min，阿特拉通9.06 min， 嗪草酮9.38 min，西草净9.96 min，莠去津10.15 min，扑灭通10.19 min， 特丁通10.45 min，莠灭净10.88 min，特丁津11.21 min，扑草净11.62 min，异丙净12.23 min。液相色谱-质谱/质谱色谱图参见附录C中图C.2。
7.3.4 定性测定
按照上述条件测定试样和标准溶液，如果试样中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液相比在±2.5%的允许偏差之内；样品中待测组分的两个子离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在相应的目标化合物。
7.4空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。
8结果计算和表达
试样中待测化合物的残留量可以采用测定仪器的软件处理器或者按式（1）计算：
式中：
X——试样中被测组分的残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A——样液中被测组分的峰面积；
AS——标准工作液中被测组分的峰面积；
cs——标准工作液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。
注：计算结果需将空白值扣除。
9测定低限和回收率
9.1测定低限
本标准液相色谱法对各待测物的测定低限为0.02mg/kg；液相色谱-质谱/质谱法对各待测物的测定低限为0. 005 mg/kg。
9.2 回收率
本标准高效液相色谱法三嗪类除草剂添加浓度在0.020mg/kg~1.00mg/kg范围内，平均回收率为71. 87%~101.94% ，相对标准偏差为2.25%~10.73%。
本标准液相色谱-质谱/质谱法三嗪类除草剂添加浓度在0.02mg/kg~1.0mg/kg范围，平均回收率为62. 66%~120.1%，相对标准偏差为2. 55%~19.61%。
