GB/T 5009.218-2008 水果和蔬菜中多种农药残留量的测定
2水果和蔬菜中211种农药残留量的测定
2.1 原理：试样中用水-丙酮均质提取，经二氯甲烷液液分配，以凝胶色谱柱净化，再经活性炭固相柱净化，洗脱液浓缩并溶解定容后，供气相色谱质谱（GC-MS）测定和确证，外标法定量。
2.2试剂和材料：除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二级水，电导率25℃≤0. 10 mS/m。
2.2.1 丙酮（C3H6O）：残留级。
2.2.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：残留级。
2.2.3 乙酸乙酯（C4H8O2）：残留级。
2.2.4 环己烷（Cyclo-C6H14）：残留级。
2.2.5正己烷（n-C6H14）：残留级。
2.2.6 甲醇（CH4O）：残留级。
2.2.7 苯（C6H6）：残留级。
2.2.8 氯化钠（NaCl）：优级纯。
2.2.9 无水硫酸钠（Na2SO4）：650℃灼烧4 h，贮于密封容器中备用。
2.2.10 氯化钠水溶液：20g/L。
2.2.11 活性炭必威首页登录平台官网
（pesticarb）：0.5g，或相当者，使用前用5mL正己烷预淋洗。
2.2.12 211种农药标准品：纯度均≥93.5%，见表A.1和表A. 2。
2.2. 13 标准溶液
2.2.13.1 标准储备液：分别准确称取适量的每种农药标准品，用丙酮或相应溶剂（见表A.1和表A.2）配制成浓度为500μg/mL~1000μg/mL的标准储备液。该溶液可在0℃~4℃冰箱中保存12个月。
2.2.13.2 标准中间工作液：根据农药的性质及其在色谱保留时间的不同，将211种农药分成A.B两组，分别准确移取一定体积的各农药标准储备液，可根据需要用丙酮稀释成适用浓度的A组混合标准中间工作液和B组混合标准中间工作液。该溶液可在0℃~4℃冰箱中保存6个月。
2.2.13.3 混合标准工作液：准确移取一定体积的A组混合标准中间工作液和B组混合标准中间工作液，可根据需要用正己烷稀释成适用浓度的A组混合标准工作液和B组混合标准工作液。该溶液可在0℃~4℃冰箱中保存1个月。
2.3仪器和设备
2.3.1气相色谱质谱仪：配有电子轰击源（EI）。
2.3.2 凝胶色谱仪：配有馏分收集器。
2.3.3食品捣碎机。
2.3.4均质器。
2.3.5 旋转蒸发器。
2.3.6氮吹仪。
2.3.7漩涡混合器。
2.3.8 无水硫酸钠柱：7.5cmX1.5cm（内径），内装5cm高无水硫酸钠。
2.3.9具塞锥形瓶：250mL。
2.3.10分液漏斗：250mL。
2.3.11 浓缩瓶：50mL、250mL。
2.3. 12 移液器：1000μL、100μL、10μL。
2.4试样制备与保存
2.4.1试样制备
取水果或蔬菜样品500g，或去壳去籽、去皮去茎、去根去冠（不可用水洗涤），将其可食用部分切碎后，依次用食品捣碎机将样品加工成浆状。混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。
2.4.2试样保存：将试样于0℃~4℃保存。
注：在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
2.5 测定步骤
2.5.1 提取
称取约25g（精确至0.1g）试样于250mL具塞锥形瓶中，加入20mL水，混摇后放置1 h。然后加入100mL丙酮，高速均质提取3 min。将提取液抽滤于250mL浓缩瓶中。残渣再用50mL丙酮重复提取一次，合并滤液，于40℃水浴中旋转浓缩至约20mL。将浓缩提取液转移至250mL分液漏斗中。
在上述分液漏斗中，加入100mL氯化钠水溶液和100mL二氯甲烷，振摇3min，静置分层，收集二氯甲烷相。水相再用2×50mL二氯甲烷重复提取两次，合并二氯甲烷相。经无水硫酸钠柱（2.3.8）脱水，收集于250mL浓缩瓶中，于40℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5mL乙酸乙酯环己烷（1+1）以溶解残渣，并用0.45μm滤膜过滤，待净化。
2.5.2净化
2.5.2.1凝胶色谱净化（GPC）
2.5.2.1.1凝胶色谱条件
a） 净化柱：700mm×25mm， Bio Beads S-X3，或相当者。
b） 流动相：乙酸乙酯-环己烷（1+1）。
c） 流速：5.0mL/min.
d） 样品定量环：5.0mL。
e） 预淋洗体积：50mL。
f） 洗脱体积：210mL。
g） 收集体积：105mL~185mL。
2.5.2.1.2凝胶色谱净化步骤：将5mL待净化液按2.5.2.1.1规定的条件进行净化，合并馏分收集器中的收集液于250mL浓缩瓶中，于40℃水浴中旋转浓缩至近干，加入2mL正已烷以溶解残渣，待净化。
2. 5.2.2固相萃取净化（SPE）：将2mL溶解液倾入已预淋洗后的活性炭必威首页登录平台官网
中，用30mL乙酸乙酯-正己烷（2+3）进行洗脱。收集全部洗脱液于50mL浓缩瓶中，于40℃水浴中旋转浓缩至干。用乙酸乙酯溶解并定容至2.0mL，供气相色谱-质谱测定。
2.5.3气相色谱-质谱测定
2.5.3.1气相色谱-质谱条件
a） 色谱柱：30m×0. 25mm（内径），膜厚0.25μm，DB-5MS石英毛细管柱，或相当者。
c） 进样口温度：280℃。
d） 色谱-质谱接口温度：280℃。
e） 载气：氦气，纯度≥99.999%，1.2mL/min。
f） 进样量：1μL。
g） 进样方式：无分流进样，1.5min后开阀。
h） 电离方式：EI。
i） 电离能量：70 eV。
j） 测定方式：选择离子监测方式。
k） 溶剂延迟：5 min。
l） 选择监测离子（m/z） ：将211种农药分成A、B两组，每种农药分别选择1个定量离子，2个~3个定性（阳性确证）离子。两组选择监测离子时间设定参数参见表E.1和表E.2，每种农药的定量离子和定性离子参见表C.1和表C.2。
2.5.3.2定量测定
根据样液中被测农药含量，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和待测样液中农药的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对混合标准溶液与样液等体积分组分时段参插，进样测定。外标法定量。在上述气相色谱质谱条件下，各标准物质的保留时间参见表C.1和表C.2，气相色谱-质谱选择离子色谱图参见图F.1和图F.2。
2.5.3.3定性测定
对混合标准溶液及样液按上述规定的条件进行测定时，如果样液与混合标准溶液的选择离子图中，在相同保留时间有峰出现，则根据定性选择离子的种类及其丰度比对其进行阳性确证。各种农药的选择离子的种类及其丰度比参见表C.1和表C.2。
2.6 结果计算
按式（1）计算试样中每种农药残留含量：
式中：
Xi——试样中农药i残留量，单位为微克每克（μg/g）；
Ai——样液中农药i的峰面积（或峰高）；
ci——标准工作液中农药i的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
Ais——标准工作液中农药i的峰面积（或峰高）；
m——最终样液代表的试样质量，单位为克（g）。
2.7精密度
本方法对211种农药在0. 1 mg/kg~5. 0 mg/kg浓度水平，添加回收率和精密度参见表C.1和表C.2。
3水果和蔬菜中107种农药残留量的测定
3.1 原理：试样中农药用有机溶剂提取，再经液液分配除去干扰物质，用气相色谱质谱仪测定，当被测组分不能满足分离条件时，更换不同极性色谱柱加以分离，内标法定量。
3.2试剂和材料：除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二级水，电导率25℃≤0.10 mS/m。
3.2. 1丙酮（C3 H6O）：重蒸馏。
3.2.2石油醚：30℃~60℃，重蒸馏。
3.2.3正己烷（n-C6H14）：重蒸馏。
3.2.4 苯（C6H6）。
3.2.5二氯甲烷（CH2Cl2）：重蒸馏。
3.2.6甲醇（CH4O）。
3. 2.7氯化钠（NaCl）。
3.2.8 无水硫酸钠（Na2SO4）：在550℃灼烧4 h，置入干燥器中冷却，备用。
3.2.9农药标准品：107农药标准品纯度均≥91%，见表B.1。
3.2. 10内标标准物质：内吸磷，纯度≥98% ；乙基谷硫磷，纯度≥98%。
3.2.11农药标准溶液：分别准确称取附录B中每种农药的标准品，见表B.1的溶剂选择，用丙酮、苯、二氯甲烷、甲醇或正己烷分别配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。再根据需要用丙酮配制成不同浓度的混合标准工作溶液。标准储备液保存于4℃冰箱中，可使用一年；混合标准工作溶液保存于4℃冰箱中，可使用一个月。
3.2.12内标标准溶液：分别准确称取内吸磷和乙基谷硫磷标准品，用丙酮配制成1mg/mL的混合内标储备液，根据需要再稀释成合适浓度的内标工作液。
3.3仪器和设备
3.3.1气相色谱-质谱联用仪：带有电子轰击离子源（EI）。
3.3.2快速漩流浓缩仪：配有冷却循环水机。
3.3.3组织捣碎机。
3.3.4高速均质器：8000r/min~24000r/min。
3.3.5离心机：3000r/min。
3.4 测定步骤
3.4.1 制样：取约200g蔬菜、水果试样，经组织捣碎机破碎成浆状。
3.4.2 提取
称取10.0g混匀的试样，于100mL离心管中，加入25mL丙酮，定量加入内标工作溶液，高速均质2 min，于3 000r/min下离心5 min，将上清液经垫有滤纸的漏斗移至250mL分液漏斗中。于离心管中再加入25mL丙酮，高速均质2 min，在3000r/min下离心5 min，. 上清液经过滤合并至分液漏斗中。
3. 4.3净化
上述分液漏斗中加入20mL石油醚、20mL二氯甲烷，用力振摇1 min，将下层水相转移至另一只分液漏斗中，上层有机相移至具塞三角瓶中。向装有水相的分液漏斗中加入2g氯化钠，用力振摇至氯化钠基本溶解，加入2×20mL二氯甲烷，用力振摇1 min，将下层有机相合并于三角瓶中。向三角瓶中加入约15g无水硫酸钠，静置约30min。
将脱水后提取液经垫有滤纸的漏斗转移至快速漩流浓缩仪的浓缩瓶中，用2×20mL二氯甲烷洗涤硫酸钠，一并转移至浓缩瓶中。设定快速漩流浓缩仪水浴温度为30℃、扇叶旋转速度为4000r/min，冷凝套内循环水温度控制在5℃~10℃之间，在此条件下浓缩至1mL，供气相色谱质谱分析。
3.4.4气相色谱-质谱测定
3.4.4.1气相色谱测定条件
a） 色谱柱：石英毛细管柱DB-5MS，柱长25 m，内径0.25 mm，涂膜厚度0.25μm。
石英毛细管柱DB-35MS，柱长25 m，内径0. 25 mm，涂膜厚度0.25μm。
石英毛细管柱DB-1701 ，柱长25 m，内径0. 25 mm，涂膜厚度0.25μm。
柱与进样口汽化室之间接1 m长的预柱。
b） 载气：氦气，纯度≥99.999%。
c：） 载气流速：1mL/min。
d） 柱温：初始温度为50℃，以20℃/min程序升温至120℃，再以3℃/min程序升温至280℃，保持15 min。
e） 进样量：2μL。
f） 进样方式：不分流进样，1min后打开分流阀。
g） 进样口温度：260℃。
3.4.4.2质谱测定条件
a） 接口温度：250℃。
b） 电离方式：EI。
c） 电子能量：70 eV。
d） 离子源温度：200℃。
e） 检测电压（光电倍增器）：350V（检测时可根据灵敏度作调整）。
f） 扫描范围：全扫描检测质量范围为50 u~550 u，扫描速度0.45 s。
g） 选择离子检测：根据被测物的保留时间，在对应的时间窗内设定特征离子，107种农药所选择的筛选和定性离子参见表D.1。
h） 扫描速度：0.1 s。
i） 溶剂延时：5 min。
式中：
X——样品中每一种被测农药残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
H——样品中被测农药选择离子的峰高或峰面积；
H'i——标准溶液中内标物选择离子的峰高或峰面积；
c’——标准溶液中农药的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
mi——样品中添加内标物的质量，单位为微克（pg）；
Hi——标准溶液中农药选择离子的峰高或峰面积；
H'——样品中内标物选择离子的峰高或峰面积；
c'i——标准溶液中内标物质的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
m——样品的质量，单位为克（g）。
3.6回收率和精密度
本方法回收率和精密度参见附录I。
