中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5446-2022
出口植物源性食品中喹啉铜残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
前 言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国广州海关、中华人民共和国黄埔海关。
本文件主要起草人：徐娟、谢守新、邵琳智、李敏青、孙灵慧、庄嘉。
1 范围
本文件规定了出口植物源性食品中喹啉铜残留量的液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。
本文件适用于番茄、梨、苹果、黄瓜、柿子和山核桃中喹啉铜残留量的测定和确证。
2 规范性文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
采用1%乙酸超声提取试样中的喹啉铜，以N-丙基乙二胺固相吸附剂（PSA）和C18粉末净化，稀释、过滤后供液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。
5 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 乙腈：色谱纯。
5.2 甲醇：色谱纯。
5.3 乙酸：色谱纯。
5.4 甲酸：色谱纯。
5.5 0.25 %甲酸溶液：量取2.5 mL甲酸（5.4），用水定容至1 L。
5.6 1%乙酸溶液：量取10 mL乙酸（5.3），用水定容至1 L。
5.7 喹啉铜标准物质（Oxine Copper）：C18H12CuN2O2，CAS 号10380-28-6，纯度≥99.0 %。
5.8 喹啉铜标准储备液：准确称取喹啉铜标准品10 mg（精确到0.1 mg）于100 mL容量瓶中，用甲醇（5.2）溶解并定容至刻度，配制成浓度为0.1 mg/mL的标准储备液，于-18 ℃以下避光保存，有效期6个月。
5.9 喹啉铜标准溶液：准确吸取喹啉铜标准储备液1 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇（5.2）定容至刻度，此标准溶液1 mL相当于1 μg喹啉铜标准品，于 0 ℃ ~4 ℃ 冰箱内储存，有效期3周。
5.10 喹啉铜标准曲线：吸取适量的上述标准溶液（5.9），用空白样品基质配制成喹啉铜浓度分别为0 mg/L、0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L的系列标准曲线，现用现配。
5.11 微孔滤膜：0.22μm，有机型。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-质谱/质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。
6.2 电子天平：感量为 0.000 1 g 和 0.01 g。
6.3 组织捣碎机。
6.4 离心机：4 000 r/min，12 000 r/min。
6.5 超声波清洗器。
6.6 涡旋混合器。
7 试样制备与保存
7.1 蔬菜和水果
蔬菜和水果的取样部位按照 GB 2763 的规定执行，取样品 500 g，用组织捣碎机均质， 充分混匀，均分为 2 份，密封并标明标记，于 -18℃ 条件下保存。
7.2 坚果
坚果样品去壳取全果 500 g，用组织捣碎机均质，充分混匀，均分为 2 份，密封并标明标记，于 0℃- 4℃ 条件下保存。
8 测定步骤
8.1 提取
称取约5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入10 mL 1%乙酸（5.6），超声15 min，4 000 r/min离心5 min，收集提取液于25 mL塑料容量瓶中；再加入10 mL上述提取液，再次超声提取15 min后，以4 000 r/min离心5 min，合并上清液并以1 %乙酸定容至25 mL。
8.2 净化
取1 mL提取液加入装有PSA 粉末50 mg和C18粉末50 mg的高速离心管里，涡旋1 min后以12 000 r/min离心5 min，取0.5 mL 净化后的提取液与0.5 mL 0.25% 甲酸（5.5）混合均匀，经0.22 μm 微孔膜过滤后装瓶，供LC-MS/MS测定。
8.3 测定
8.3.1 液相色谱条件
8.3.1.1 色谱柱：ODS-4色谱柱，150 mm×2.1 mm（内径），粒径 3 μm 或相当者。
8.3.1.2 柱温：40℃。
8.3.1.3 流动相：乙腈（5.1）-0.25%甲酸溶液（5.5），梯度见表1。
8.3.1.4 流速：0.2 mL/min。
8.3.1.5 进样量：5 μL。
8.3.2 质谱条件
8.3.2.1 离子源：电喷雾离子源。
8.3.2.2 扫描方式：正离子扫描。
8.3.2.3 检测方式：多反应监测模式（MRM）。
8.3.2.4 监测离子对、定量离子对见表 2。
8.3.2.5 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气及其他适合气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞气能量等参数值应优化至最佳灵敏度， 其他参考质谱参数参见附录 A。
8.3.3 液相色谱-质谱/质谱检测和确证
8.3.3.1 定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和标准工作液，试样中目标化合物的保留时间与标准工作液中对应化合物的保留时间偏差在±2.5%之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，且每个离子的信噪比均≥3，则可判断试样中存在相应的被测物。
8.3.3 .2 定量测定
将标准工作液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱/质谱仪中，测得定量离子峰面积。标准工作液和待测液中，喹啉铜的响应值均应在仪器检测的定量线性范围内。在上述仪器条件下，喹啉铜的提取离子色谱图参见附录 B。
8.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
9 结果计算和表述
试样中喹啉铜的含量由液相色谱-质谱/质谱仪的数据处理软件或按式（1）计算，计算结果应扣除空白值。
式中：
X ——试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
C——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；
m ——最终定容体积试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。
注： 当浓度小于1 mg/kg，结果保留 2 位有效数字；当浓度大于1 mg/kg，结果保留 3 位有效数字。
10 定量限与回收率
10.1 定量限
喹啉铜的定量限为0.1 mg/kg。
10.2 回收率
番茄、苹果、梨、黄瓜、柿子和山核桃中喹啉铜的添加水平及回收率数据参见附录C。
