中华人民共和国国家标准
农业部1077号公告-5-2008
水产品中喹乙醇代谢物残留量的测定
高效液相色谱法
Determination of olaquindox metabolite residues in fishery products
by high performance liquid chromatography
前言
本标准附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。
本标准起草单位:农业部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心(舟山)、舟山市越洋食品有限公司。
本标准主要起草人:郑斌、虞岚、陈雪昌、张小军、陈伟斌、朱婧睿、梅光明、蔡水根。
1范围
本标准规定了水产品中喹乙醇代谢物3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)残留量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中喹乙醇代谢物3 -甲基喹噁啉-2-羧酸残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于木标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
SC/T 3016水产品抽样方法
3原理
以乙酸乙酯提取样品中残留的喹乙醇代谢物3-甲基喹噁啉-2-羧酸,用pH8的腾酸盐缓冲液萃取,萃取液用盐酸调至酸性,再用乙酸乙酯进行反萃取,萃取液浓缩至干后,残渣用流动相溶解,反相色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法定量。
4试剂和材料
除有特殊说明外,所用试剂均为分析纯。
4. 1试验用水应符合GB/T 6682一级水的要求。
4.2甲醇:色谱纯。
4.3乙酸乙酯:色谱纯。
4.4盐酸。
4.5 甲酸。
4.6 0.1mol/L磷酸盐缓冲液:称取12.0g磷酸二氢钠和14.2g磷酸氢二钠,加水溶解,用1mol/L氢氧化钠调pH至8.0,加水定容至1000mL。
4.7 1.0%甲酸水溶液:量取10 mL甲酸并加水定容至1 000 mL。
4.8 3-甲基喹噁啉-2-羧酸标准品:纯度>98%。
4.9 MQCA标准储备液:准确称取10mg的标准品,用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中,配成标准储备液,浓度为100 mg/L。避光冷藏保存,保存期为3个月。
4.10 MQCA标准工作液:用流动相稀移成各质量浓度的标准溶液,现配现用。
5仪器
5.1高效液相色谱仪:配紫外检测器。
5.2 天平:感量0.01 g。
5.3 分析天平:感量0.00001 g。
5.4旋涡混合器。
5.5离心机:最大转速 14 000 r/min。
5.6 氮吹仪。
5.7高速组织捣碎机。
5.8分液漏斗:150 mL。
6操作方法
6.1 样品处理
6.1.1试样制备
按SC/T 3016的规定执行。
6.1.2 提取
称取(5±0.02)g样品置于50mL离心管中,加入15mL乙酸乙酯,匀浆5min,盖塞,旋涡混匀,4 000 r/min离心5 min,取上清液转入150 mL分液漏斗中。再用15 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并提取液于同一分液谢斗中。
往样品残渣中加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液10mL,旋祸混匀,振荡30s,8000r/min离心10min,取上清液合并到分液漏斗中。手播振荡分液漏斗30 s,静置分层,收集下层溶液至25 mL具塞离心管中。
加入盐酸200μL,混匀,再加入乙酸乙酯6mL,旋涡混勾,振荡30s,8000r/min离心10min,上层溶液转入玻璃试管中,再用6 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并上层溶液于同一玻璃试管,55℃氮气流下吹干,用1 mL流动相溶解残渣,旋涡混匀,0.45 μm微孔滤膜过滤,待测。
6.2样品测定
6.2.1色谱条件
色谱柱:ZORBAX SB- C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);或性能相当者。
b)流动相:甲醇+ 1.0%甲酸水溶液(40+60)。
c)流速:1. 0 mL/min。
d)柱温:30℃。
e)进样量:50 μL。
f)检测波长:320 nm。
6.2.2标准工作曲线的制作
准确取MQCA标准储备液,用流动相稀释成为0.005 μg/ mL、0.01 μg/ mL、0.05 μg/ mL、
0. 25 μg/ mL、0.50 μg/ mL、1.0 μg/ mL系列标准工作液,供高效液相色谱分析。
6.2.3色谱分析
根据样品液中MQCA残留量情况,选定峰而积相近的标准工作溶液进行定量。分别注入50μL MQCA标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中,按上述色谱条件进行分析,记录峰面积,响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据MQCA标准品的保留时间定性,外标法定量。色谱图参见附录A。
7空白试验
除不加试样外,均按上述测定步骤进行。
8结果计算
样品中MQCA的残留量按公式(1)计算,计算结果需扣除空白值。结果保留3位有效数字。
式中:
X——试样中MQCA的含量,单位为微克每千克(μg/kg);
C——试样溶液中MQCA的含量,单位为微克每毫升(μg/ mL);
m——试样质量,单位为克(g);
V——试样溶液体积,单位为毫升(mL)。
9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法最低定量限为4 μg/kg。
9.2 准确度
本方法添加浓度为4.0 μg/ kg~200 μg/ kg时,加标回收率为70%~ 120%。
9.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤15% ,批间相对标准偏差≤15%。