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Sephadex LH-20葡聚糖凝胶
——最适合天然产物的纯化,特别是嗜脂性分子纯化及制备
Sephadex 葡聚糖凝胶通过表氯醇交联多个葡聚糖得到。
葡聚糖是以蔗糖为底物的细菌Leuconsostocmesenteroides的代谢产物,为线性高度聚合碳水化合物的总称。由于每个葡聚糖单元含有三个羟基,因此葡聚糖易溶于水。要使葡聚糖不溶于水,而成为可以在水中溶涨的凝胶,就必须与双官能团的表氯醇交联。表氯醇的比例越大,交联成分越高,胶的溶涨能力就越小,排阻极限就越低,这时的产品为G-10、G-25等。
我们知道G-10、G-25这些葡聚糖凝胶是在水溶液中使用,若要用有机溶剂作为流动相,只有通过羟丙基化将Sephadex G转化为可在有机溶剂中溶涨的葡聚糖凝胶。这时的产品为Sephardex LH-20.或LH-60。
层析原理:
· 分配层析----------------依赖于被分离化合物在流动相(溶剂)和固定相(凝胶)之间的分配,这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。
特点:
· 适合用有机溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物
Sephadex LH-20性质
Sephadex LH-20性质和操作
干胶溶胀表
排阻极限
4-5KD(球蛋白)
溶剂
溶胀体积(ml凝胶/g干胶粉末)
上样量
取决于所需分辩率
Dimethyl sulphoxide 二甲亚砜
4.4-4.6
尺寸排阻模式
小于总体积的20%
Pyridine 嘧啶
4.2-4.4
正相分配模式
小于总体积的1%
Water 水
4.0-4.4
胶粒形状
球形,多孔
Dimethylformamide
二甲基甲酰胺
3.8-4.2
颗粒大小(干)
18-111μm(直径)
Saline 生理盐水
3.9-4.1
颗粒大小中间值(干)
70μm(直径)
Methanol 甲醇
3.8-4.1
颗粒大小(甲醇)
27-163μm(直径)
Methane dichloride 二氯乙烷
颗粒大小中间值(甲醇)
103μm(直径)
Chloroform 氯仿
最大线性流速
720cm/h
Proanol 丙醇
3.7-4.0
参考线性流速
60cm/h
Ethanol 乙醇
3.6-3.9
pH的稳定性
Isobutanol异丁醇
操作过程
2-11
Formamide 甲酰胺
清洗过程
2-13
Methylene dichloride 二氯甲烷
化学稳定性
在许多水溶液中都稳定
Butanol 丁醇
3.5-3.8
有机溶剂系统中都稳定.
Isopropanol异丙醇
3.3-3.6
高压灭菌
Tetrahydrofuran
四氢呋喃
121 ℃, 20min
Dioxane 二氧杂环己烷
3.2-3.5
操作温度
4℃-40℃
Acetone丙酮
2.4-2.6
保存条件
Acetonitrile乙腈
2.2-2.4
新填料
4-25℃
Carbon tetrachloride 四氯化碳
1.8-2.2
使用后填料
4-8℃, pH6-8, 勿冷冻,
Benzene 苯
1.6-2.0
加入抑菌剂(如20%乙醇,0.04%叠氮钠)
Ethyl acetate乙酸乙酯
1.6-1.8
Toluene甲苯
1.5-1.6
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