奶制品中己烯雌酚检测的固相萃取方法

一、实验目的：

奶制品中己烯雌酚本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物：

己烯雌酚CAS：56-53-1。

三、应用范围

本方法适用于奶制品中己烯雌酚HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 22992-2008 牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》。

五：实验材料

SimplyGreen MAX必威首页登录平台官网 60mg/3mL。(货号：SG02-06003)

六、实验方法

1：样品提取

取5 mL样品，置于离心管中，加入10 mL乙腈，涡旋混合3 min，3500 r/min，取上清液于离心管中，再向样品中加入5 mL乙腈，同前操作，合并提取液，50 ℃下氮吹至体积小于0.1 mL加水10 mL用5 mol/L NaOH 调节pH至11.04 ℃9000 r/min离心5 min，备用

2、SPE柱净化

(1)活化：加入2 mL甲醇、2 mL水活化，流速为4 mL/min。

(2)上样和洗脱：将样品上清液上柱，流速为1 mL/min，依次用1 mL 氨水-水（1:19v/v）0.5 mL甲醇以3 mL /min的流速淋洗，通入20 mL空气以4 mL/min的速度吹过SPE柱，用4 mL甲酸-甲醇（1:19v/v）洗脱，流速为 1 mL/min, 加入30 mL空气以6 mL/min的速度吹过SPE柱，收集洗脱液。

(3)重新溶解：洗脱液在氮吹仪上于40 ℃水浴中吹干，加入1 mL流动相，涡旋30 s溶解。过0.2 µm滤膜后，用于HPLC测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2690

检测器：Waters 2487 双波长检测器；

检测波长：245 nm

色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)

流动相：等度洗脱，0.1%甲酸水/甲醇=30/70

流速：1 mL/min

进样体积：20 µL

柱温：室温

七、实验结果

1、牛奶基质加标回收结果：

表1 牛奶中0.2mg/kg加标回收实验结果

2、 添加水平为0.2mg/kg牛奶基质中乙烯雌酚检测色谱图

图1  添加水平为0.2mg/kg牛奶基质中乙烯雌酚检测色谱图

八、结论

SimplyGreen MAX必威首页登录平台官网 萃取奶制品中的己烯雌酚，提取回收率高达90%，重现性好，符合国家标准要求。